Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

DIY GFP (Green Fluorescent Protein) Illuminateur

Ce n’est pas un fétiche effrayant qui m’a incité à lire The Worm Breeder’s Gazette.Il s’agissait plutôt de parler à Kathryn Hedges - une scientifique et artiste intelligente, passionnée et bien reconnue - de La Gazette conseils pour fabriquer un illuminateur GFP pour pas cher. La GFP, ou protéine fluorescente verte, est un marqueur fluorescent fréquemment utilisé en biologie moléculaire et en neuroscience.

Au cours de son programme de maîtrise à la Humbolt State University, Kathryn, comme de nombreux autres chercheurs scientifiques, a été confrontée à des difficultés de budget et de difficulté à trouver une subvention. Afin de poursuivre ses travaux sur les neurones nématodes dans un service à court d’argent alors qu’elle avait besoin de nouveaux équipements après 11 heures, Kathryn a lancé le pouvoir de sa mentalité «Voyons comment nous pouvons faire cela mieux et à meilleur prix» pour pirater le bricolage. Illuminateur GFP dans un meilleur système, digne de la recherche, capable de visualiser les neurones dans des vers minuscules de seulement 1 millimètre de long.

Pourquoi était-ce important pour Kathryn? Selon elle, «une de mes souches a continué à choisir contre GFP si je ne sélectionnais pas à la main les vers les plus brillants de chaque génération. Sans un moyen de voir GFP sur le microscope «à dissection» où je cueillais des vers individuels avec une minuscule spatule en fil métallique, je ne pouvais pas garantir que toute leur progéniture serait fluorescente, ce qui pose un problème lorsque j'essaie de voir si un traitement les endommage et leur fait perdre de la fluorescence. "

Résultat: «Les seuls microscopes dotés de la capacité GFP ne permettaient pas de grossir les vers tout en les déplaçant, et l’achat d’un‘ scope adéquat approprié aurait coûté des milliers de dollars. Il me restait 750 dollars dans mon budget, alors j'ai dépensé environ 80 dollars en pièces à LED et construit un illuminateur. Ce n’était pas assez brillant pour voir de longues cellules minces, alors j’ai dépensé 825 $ en filtres de haute qualité, récupéré un ancien oculaire de microscope comme objectif focalisant et utilisé des raccords de plomberie pour le monter sur un micromanipulateur que nous avions au laboratoire. Ensuite, je pouvais sélectionner mes vers les plus brillants, élever des larves de ver brillamment brillantes et terminer mes expériences. Si j’avais suivi une fonction plus importante dans GFP, ou si j’avais utilisé Protéine fluorescente rouge, j’aurais probablement pu utiliser des filtres bon marché et faire le tout à moins de 100 $. Si je devais poursuivre mes expériences, je pourrais utiliser cet illuminateur lors du croisement de souches de GFP pour voir quelle progéniture porte les deux marqueurs GFP. ”

Le directeur de thèse de Kathryn a encouragé ce type d’expérimentation, car lui-même et son propre directeur de thèse avaient mis au point leur propre équipement de bricolage pour détecter la vitesse de conduction nerveuse dans un petit annélide d’eau douce. Le prototype est toujours suspendu à un tableau d'affichage au-dessus de son bureau. Non seulement il enseigne aux étudiants en physiologie animale comment faire de la neurophysiologie de manière non invasive, mais ses étudiants chercheurs lui et lui ont publié des articles utilisant cette méthode pour collecter des données. Il est fan de Backyard Brains Spiker Box et espère le voir en action.

En piratant son propre outil, sans supporter la dépense trop lourde d'acheter un illuminateur moyen pour des milliers de dollars (même utilisé), Kathryn a pu terminer sa thèse. L’illuminateur est utile pour tous les scientifiques du bricolage qui ont besoin de visualiser l’expression des gènes de la GFP ou de la RFP (protéine fluorescente rouge) dans une bactérie ou c. elegans. Et Kathryn est la preuve que vous pouvez le faire avec un centime.

Détails sur l'illuminateur GFP de base de Gazette des éleveurs de vers sont en dessous (après le saut). Pour en savoir plus sur les améliorations de Kathryn et voir ses notes sur les vers, consultez son post sur Couleurs splendides.

[Crédit: Ian Chin-Sang et Weiwei Zhong]

Utilisation de LED comme source à faible coût pour détecter GFP et DsRED

Ian Chin-Sang1 et Weiwei Zhong, département de biologie, Université Queen’s, Kingston, ON, Canada, 2D département de biochimie et de biologie cellulaire, Université Rice, Houston, TX Correspondance à: Weiwei Zhong ([email protégé])

Les composants de détection de fluorescence sont trop coûteux pour être installés dans chaque stéréoscope. Souvent, nos marqueurs fluorescents sont très lumineux et ne nécessitent pas toute la capacité de ce type d’équipement. Nous présentons ici une configuration de diodes électroluminescentes qui ne coûte que 100 USD et peut détecter des marqueurs fluorescents lumineux tels que myo-2 :: GFP. La configuration (Fig. 1) comprend:

  • X-acto ou tout ce qui peut positionner le voyant (Amazon.com)
  • Cordon de lampe doté d'un commutateur (quincaillerie locale)
  • Driver Xitanium LED de 17 watts (alimentation LED)
  • Connecteur de pilote Xitanium (Alimentation LED)
  • Dissipateur thermique (alimentation LED)
  • Lentille Spot (Alimentation LED)
  • Support optique Luxeon V Star (Alimentation LED)
  • DEL Royal-Blue Luxeon V Star pour la détection GFP (Alimentation LED) ou Vert Luxeon V Star LED pour la détection dsRED (Alimentation LED)
  • Filtre d'excitation en option: Roscolux n ° 4290 CalColor 90 bleu pour GFP ou vert n ° 389 pour dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • Filtre d'émission: paille Roscolux n ° 12 pour GFP ou incendie n ° 19 pour dsRED (disponibilité identique à celle des filtres d'excitation)

Vous trouverez des détails sur la mise en place de cet appareil ici et ici.

Fig 1. La configuration de la LED

Fig 2. Utilisation de la configuration des voyants pour détecter myo-2 :: GFP chez un animal mIn1.

Fig 3. Utilisation de la configuration des voyants pour détecter myo-2 :: dsRED.

Lors de l'assemblage de la LED sur le driver, assurez-vous que les pôles +/- de la LED et les pôles neutre / ligne du cordon de la lampe correspondent à ceux du driver. Utilisez une colle non conductrice telle qu'un adhésif silicone (Devcon, pièce n ° 12045, quincaillerie locale) pour placer le porte-objectif sur la LED. Le filtre d'excitation peut être collé à la lentille en appliquant une petite quantité de colle sur le bord. Le filtre d'émission peut être simplement collé sous l'objectif du microscope.

Cette configuration a une longue durée de vie, ne nécessite ni temps de préchauffage ni de refroidissement, et ne émet aucune radiation. Cependant, il ne peut détecter que les signaux forts. Nous avons utilisé la configuration pour détecter les marqueurs suivants: myo-2 :: GFP (Fig. 2), sur-5 :: GFP, ajm-1 :: GFP et myo-2 :: dsRED (Fig. 3).

Utilisation de LED comme source à faible coût pour détecter GFP et DsRED


Bio: Eri Gentry est un entrepreneur en biotechnologie, un organisateur de la communauté citoyenne et le cofondateur de BioCurious, le premier espace de piratage pour la biotechnologie, dans la région de la baie de San Francisco.

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